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|a Untersuchung Von Glykosylierungsleistung und Intrazellulären Nukleotidzucker-Konzentrationen Rekombinanter CHO-Zellen Unter Hypothermen Kulturbedingungen
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|a Berlin :
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|a Bielefelder Schriften Zur Zellkulturtechnik Ser. ;
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|a Intro; 1. Theorie 1; 1.1. Zielsetzung der Arbeit; 1.2. Einführung; 1.3. Das Modellglykoprotein Erythropoietin; 1.4. Biosynthese komplexer N-Glykane; 1.5. Metabolismus der Nukleotidzucker; 1.5.1. Biosynthese der UDP-Nukleotidzucker; 1.5.2. Biosynthese von CMP-Sialinsäure; 1.5.3. Biosynthese von GDP-Mannose und GDP-Fucose; 1.5.4. Transport der Nukleotidzucker in Golgi und ER; 1.6. Beinflussende Faktoren der Glykosylierung in Zellkulturprozessen; 1.6.1. Mediumskomponenten; 1.6.2. Prozessparameter; 1.6.3. Glycosidasen; 2. Material und Methoden; 2.1. Zellkultivierung; 2.1.1. Zelllinien
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|a 2.1.2. Zellkulturmedien2.1.3. Kryokonservierung; 2.1.4. Zellanzucht für Bioreaktorkultivierungen; 2.1.5. Kultivierung in Schüttelflaschen; 2.1.6. Kultivierung im Bioreaktor; 2.2. Analytik der Zellkulturprozesse; 2.2.1. Zelldichte und -viabilität; 2.2.2. Produktkonzentration; 2.2.3. Glucose- / Lactat-Konzentration; 2.2.4. Ammonium-Konzentration; 2.2.5. Aminosäure-Konzentrationen; 2.2.6. Berechnung zellspezifischer Parameter; 2.3. Analytik der Erythropoietin-Glykosylierung; 2.3.1. Affinitätschromatographische Aufreinigung von Epo; 2.3.2. Epo-Glykoisoformenanalytik; 2.3.3. Glykananalytik
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|a 2.4. Präparation und Analyse intrazellulärer aktivierter Zucker und Nukleotide2.4.1. Probenahme; 2.4.2. Präparation; 2.4.3. Ansetzen von Kalibierstandards; 2.4.4. HPLC-Methode mit massenspektrometrischer Detektion; 2.4.5. Kapillarzonenelektrophoretische Analyse; 2.5. Methoden zur Untersuchung der Expression von Sialyltransferase; 2.5.1. Probenahme und Proteinextraktion; 2.5.2. Bestimmung der Proteinkonzentration; 2.5.3. SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese; 2.5.4. Western Blotting mit Sialyltranferase-spezifischem Antikörper; 3. Ergebnisse und Diskussion
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|a 3.1. Entwicklung von Methoden zur Messung intrazellulärer Nukleotid- und Nukleotidzucker-Konzentrationen3.1.1. Entwicklung einer HPLC-ESI-MS/MS-basierten Methode; 3.1.2. Entwicklung einer kapillarzonenelektrophoretischen Methode; 3.1.3. Untersuchungen zur Extraktion von Nukleotidzuckern und Nukleotiden; 3.1.4. Untersuchungen zur Aufreinigung der Metabolite mittels Festphasenextraktion; 3.1.5. Zusammenfassung und Diskussion der Ergebnisse; 3.2. Kultivierungen zur Untersuchung des Einflusses variierter Temperaturbedingungen; 3.2.1. Parallelkultivierung A; 3.2.2. Parallelkultivierungen B und C
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|a 3.2.3. Zusammenfassung und Diskussion der Ergebnisse3.3. Untersuchung intrazellulärer Metabolite und Enzyme des Glykosylierungsapparats für Parallelkultivierung B und C; 3.3.1. Verlauf der Nukleotidzucker-Konzentrationen; 3.3.2. Verlauf der Nukleotid-Konzentrationen; 3.3.3. Untersuchung der Sialyltransferase-Expression; 3.3.4. Zusammenfassung und Diskussion der Ergebnisse; 4. Zusammenfassung und Ausblick; A. Anhang
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|d Berlin : Logos Verlag Berlin, ©2010
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